Dosificación de Hemolisinas

Generalidades

La hemólisis inmunológica debida a la acción conjugada de dos factores, un anticuerpo específico  de los glóbulos rojos, el complemento, el anticuerpo correspondiente es denominada hemolisina.

El primer paso en la reacción es la unión del anticuerpo con el antígeno sobre la membrana del eritrocito, la unión con su anticuerpo homólogo inicia entonces la secuencia del complemento que produce la lesión lítica. La sensibilidad óptima de un glóbulo rojo parece requerir aproximadamente 1000 moléculas de anticuerpo, pero requerimiento mínimo en una sola molécula de IgM o dos moléculas de IgG muy próximas, se ha observado que la cantidad del complemento necesaria para la hemólisis completa de determinado número de células, está inversamente relacionada con la cantidad de anticuerpo suministrada.

Las isohemolisinas naturales son muy poco frecuentes, se ha señalado en algunos de los sistemas de grupos sanguíneos las isohemolisinas inmunes se observan después de inyectar sangre incompatible.

Las autohemolsimas bitermicas se ven en la hemoglobinuria paroxistica por enfriamiento; son globulinas anormales del suero, capaces de hemolizar los glóbulos rojos del paciente mismo y de otras personas, se combinan los eritrocitos a temperaturas inferiores a los 20°C y no lo hacen por arriba de esta temperatura, cuando aumenta a 25°C empieza la hemólisis, que es óptima a los 40°C las autohemolisinas monotérmicas con un margen de temperatura de 15 a 30°C, son causa de una destrucción excesiva de hematíes, anemias hemolíticas, el complemento es termolábil y se destruye a 56°C, de 20 a 30 minutos el almacenamiento a 4°C significa pérdida de ésta actividad de 2 a 3 días.

Un anticuerpo puede reaccionar primero como hemolisina, pero si se inactiva o fija el complemento, reacciona como aglutinina.

La presencia de hemolisinas en el suero de un donante del grupo «O» indica que esa sangre solo puede ser transfundida a otro paciente del mismo grupo.

Fundamento

Se basa en la activación del complemento por la formación del complejo antígeno – anticuerpo, entre el antígeno de superficie del eritrocito y la hemolisina, poniendo suero problema ante suspensiones de glóbulos rojos «A» y «B». Se puede determinar el título de hemolisinas mediante diluciones del suero problema.

Material y equipo

• 1 gradilla
• 6 tubos10 x 75
• 3 pipetas Pasteur c/bulbo
• 3 pipeta 1/10
• 1 centrifuga Serofuge
• Solución salina normal
• Suero problema
• Glóbulos rojos «A»y «B»

Procedimiento

1. Preparar suspensiones al 5% en solución salina de Eritrocitos  «A» y «B»
2. Marcar dos tubos con las letras A y B que corresponden al tipo sanguíneo
3. Depositar 0.1 ml de la suspensión de eritrocitos de cada grupo al tubo que corresponda
4. Añadir a cada tubo 0.1 ml de suero problema
5. Centrifugar a 2,500 rpm, durante 2 minutos
6. Observar si existe hemólisis en el sobrenadante de cada tubo, en caso de duda volver a centrifugar los tubos y reportar por escrito

Interpretación de resultados:

• Si a pesar de la centrifugación los glóbulos rojos no se sedimentan y el liquido del tubo es rojo, indica que los glóbulos rojos se han hemolisado
• El suero de un donador «O» con hemolisinas, solo se aplicará a un receptor del mismo grupo, no se utilizará con pacientes «A» o «B «
• Si el suero de una madre «O» hemolisa los glóbulos rojos de su hijo con eritroblástosis, es el causante de la isosensibilización de la madre

Las muestras de sangre utilizadas en el estudio del complemento, de preferencia deben manejarse a temperatura ambiente (22°C) debe separarse el suero del coagulo lo más pronto posible, para prevenir la pérdida de actividad del complemento.