GUÍA PRÁCTICA FRACCIONAMIENTO DE SANGRE

 FRACCIONAMIENTO DE COMPONENTES SANGUÍNEOS

 

MÉTODO PARA PREPARACIÓN DE GLÓBULOS ROJOS DESPLASMATIZADOS (GRD)

 

Principio 

Los glóbulos rojos desplasmatizados (GRD) se obtienen mediante la remoción de plasma sobrenadante de sangre entera centrifugada. El volumen de plasma removido determina el hematocrito del componente. Cuando los GRO son conservados CPDA-1, la viabilidad máxima durante su almacenamiento requiere una adecuada proporción células/conservante. Un hematocrito de 80% o menos, asegura una cantidad adecuada de glucosa para el metabolismo de glóbulos rojos hasta 35 días de almacenamiento. 

Materiales 

1. Sangre entera recién obtenida mediante flebotomía. Recoger la sangre en una unidad con una/s bolsa/s de transferencia. 
2. Extractor de plasma.
3. Clips metálicos y sellador manual. 
4. Instrumentos limpios. (tijeras, pinza hemostática).
5. Sellador dieléctrico (opcional).
6. Centrífuga refrigerada. 
7. Balanza. 

Procedimiento 

Si no se preparará plasma rico en plaquetas, centrifugar la sangre entera mediante una centrifugación de alta velocidad, a una temperatura de 4 °C. La centrifugación a 5000 x g durante 5 o 7 minutos (más el tiempo de desaceleración) debería ser suficiente. Cada laboratorio debe establecer sus propios parámetros.  Para calcular la fuerza centrífuga en g, se debe utilizar la fórmula: 

Figura. 1. Fórmula para calcular la fuerza centrífuga relativa. De Naval Blood Research Laboratory. Disponible en http:/ /www.nbrl.org/SOP/ACP215/collectlon.html

Si se debe obtener plasma rico en plaquetas centrifugar la sangre entera a baja velocidad. Se realizará a 2000 x g durante 3 minutos (más el tiempo de desaceleración). Cada laboratorio debe establecer sus propios parámetros.

1. Colocar la bolsa primaria con la sangre centrifugada en una prensa extractora de plasma, y liberar el resorte, permitiendo que la placa de ésta haga contacto con la bolsa. 
2. Comprimir temporalmente la tubuladura entre la bolsa primaria y las satélites con una pinza hemostática; o si no se utiliza un sellador mecánico, realizar un nudo flojo en la tubuladura. 
3. Si hay dos o más bolsas; satélites, colocar la pinza hemostática para permitir que el plasma fluya sola­mente dentro de una de ellas. Penetrar el cierre hermético de la bolsa primaria. 
4. Quitar la cantidad adecuada de plasma para obtener el hematocrito deseado. Para este propósito se puede utilizar un extractor automático. 
5. Comprimir nuevamente la pinza hemostática cuando la cantidad deseada de plasma sobrenadante haya entrado en la bolsa satélite. Sellar la tubuladura entre la bolsa primaria y satélite en dos lugares. 
6. Corroborar que la bolsa satélite tenga el mismo número de donante que la bolsa primaria, y cortar la tubuladura entre las dos selladuras

MÉTODO DE PREPARACIÓN DE CONCENTRADOS DE PLAQUETAS (CP) 

Principio

El plasma rico en plaquetas (PRP) se prepara a partir de la sangre entera por centrifugación a baja velocidad; las plaquetas se concentran por centrifugación fuerte con la posterior remoción del plasma sobrenadante.¹

Materiales 

1. Sangre entera recién extraída, obtenida mediante flebotomía, en una unidad de extracción con dos bolsas de transferencia totalmente adosadas. La bolsa final debe ser de plástico apto para el almacenamiento de plaquetas. Mantener la sangre a temperatura ambiente (20° a 24 2C) antes de separar PRP de los glóbulos rojos. Esta separación debe llevarse a cabo dentro de las 8 horas de realizada la flebotomía o dentro del marco de tiempo establecido en las guías para el uso del sistema de recolección, procesamiento y almacenamiento. 
2. Filtro en línea (si se prepara de componentes leucorreducidos prealmacenamiento). 
3. Clips metálicos y sellador manual. 
4. Instrumentos (tijeras, pinzas hemostáticas, etc.)
5. Extractor de plasma. 
6. Sellador dieléctrico (opcional). 
7. Centrífuga calibrada 
8. Balanza. 
9. Agitador de plaquetas.¹

Procedimiento

Preparación del Plasma Rico en Plaquetas (PRP)

1. No refrigerar la sangre antes o durante la separación de las plaquetas. Si la temperatura de la centrifuga es de 1°-6 °C, programar la temperatura de la centrifuga refrigerada a 20°C y permitir que la temperatura se eleve aproximadamente a 20°C. Centrifugar la sangre utilizando una centrifugación a baja velocidad 
2. Pasar el PRP a la bolsa de transferencia destinada al almacenamiento del concentrado de plaquetas. Sellar la tubuladura dos veces entre la bolsa primaria y el conector en forma de Y de las dos bolsas satélite y cortar entre las dos selladuras. Colocar los glóbulos rojos a 1°-6°C. 
3. Centrifugar el PRP a 20°C usando una velocidad de centrifugación alta 2000 x g durante 3 minutos.
4.  Pasar el plasma pobre en plaquetas dentro de una segunda bolsa de transferencia y sellar la tubuladura. Los Estándares para Bancos de Sangre y Servicios de Transfusión de exigen que permanezca suficiente plasma en el concentrado de plaquetas para mantener el pH a 6,2 o más alto durante todo el período de almacenamiento.  Para ello, usualmente se requiere un mínimo de 35 mL de plasma cuando el almacenamiento se hace a 20°-24°C, pero es preferible dejar de 50 a 70 mL. 
5.  La bolsa con el concentrado de plaquetas deberá dejarse en reposo, con la etiqueta hacia abajo a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora.
6. Resuspender las plaquetas en una de las siguientes formas: 

• manipular la bolsa de plaquetas suavemente y en forma manual para lograr una re suspensión uniforme.
• Colocar la unidad en un agitador a temperatura ambiente. Una agitación lenta y suave permitir lograr un resuspensión más uniforme dentro de las 2 horas. 
• Mantener la suspensión de las plaquetas a 20 2-24 2C con agitación continua y suave. 

        7. Se deben inspeccionar las plaquetas antes de ser liberadas para la transfusión, para verificar que              no haya agregados de plaquetas visibles.¹

Figura 2 Plasma rico en Plaquetas

Disponible: http://sph-peru.org/wp-content/uploads/2016/01/USO-RACIONAL-DE-COMPONENTES-SANGU%C3%8DNEOS.pdf

PREPARACIÓN DE LA CAPA LEUCOCITARIA (BUFFY COAT)

1. Se debe almacenar la sangre entera a 20 º-24 QC antes de la centrifugación.
2. Centrifugar la sangre entera a velocidad elevada 2800 x g para 11,5 minutos.
3. Remover el plasma sobrenadante de la parte superior de la bolsa, y los glóbulos rojos del fondo de la bolsa de extracción especialmente diseñada manualmente o mediante un instrumento automatizado. Aproximadamente 50 mL de capa leucocitaria permanece en la bolsa. 
4. Agrupar 4 a 6 unidades de Buffy coat y centrifugar a "baja" velocidad a 700 x g durante 5 minutos utilizando la centrifuga. Transferir el PRP sobrenadante dentro de la bolsa de almacenamiento de plaquetas manualmente o mediante un medio automatizado. Filtrar las plaquetas para remover leucocitos durante la transferencia.¹

Figura 3. Proceso de obtención de la capa Leucocitaria Buffy coat

Disponible: https://slideplayer.es/slide/1069796/

PREPARACIÓN DE CONCENTRADOS DE PLAQUETAS LEUCORREDUCIDAS ANTES DEL ALMACENAMIENTO

 Los concentrados de plaquetas Leucorreducidos (LR) pueden ser preparados a partir de sangre entera mediante la filtración en línea del PRP. El producto intermedio resultante es un PRP filtrado, a partir del cual se puede elaborar un concentrado de plaquetas y plasma LR. ¹

MÉTODO DE PREPARACIÓN DE PLASMA FRESCO CONGELADO A PARTIR DE SANGRE ENTERA

Principio

El plasma se separa de una unidad de sangre y se congela para conservar la actividad de los factores lábiles de la coagulación. El plasma se debe colocar en el congelador dentro de las 8 horas o tiempo especificado en las instrucciones para el uso del sistema de extracción.¹

Materiales

1. Sangre entera recién extraída obtenida por flebotomía en una unidad de extracción con bolsas de transferencia en circuito cerrado.
2. Clips metálicos y sellador manual. 
3. Instrumentos limpios (tijeras, pinza hemostática, etc). 
4. Sellador dieléctrico (opcional). 
5. Extractor de plasma. 
6. Equipo para congelaIniento. 
7. Centrífuga refrigerada. 
8. Balanza.¹

Procedimiento

1. Centrifugar la sangre entera inmediatamente luego de la extracción utilizando una centrifugación alta 5000 x g durante 5 o 7 minutos. Utilizar una centrifuga refrigerada a 1°-6°C 
2. Colocar la bolsa primaria con la sangre centrifugada en un extractor de plasma, y colocar la bolsa satélite adosada en una balanza ajustada a cero. Comprimir la unidad pasando así el plasma a la bolsa satélite y pesar el plasma. 
3. Sellar la tubuladura de la bolsa de transferencia con un sellador dieléctrico o clips metálicos, pero no anular los números de los segmentos de la tubuladura. Realizar otra selladura cercana a la bolsa de transferencia.
4. Etiquetar la bolsa de transferencia con el número de unidad antes de que se separe del contenedor original. Colocar el rótulo de Plasma fresco congelado (PFC) y registrar el volumen del mismo en el rótulo. 
5. Cortar la tubuladura entre las dos selladuras. La tubuladura puede enroscarse y pegarse con cinta en el contenedor, dejando los segmentos disponibles para cualquier prueba que se desee realizar a futuro.
6. Almacenar el plasma a -18 °C o temperaturas inferiores dentro de las 8 horas de la flebotomía.¹

Figura 4. Plasma Fresco Congelado

Disponible en: http://tsanitaris.blogspot.com/2012/05/plasma-fresco-congelado-pfc.html

MÉTODO DE PREPARACIÓN DE CRIOPRECIPITADO A PARTIR DE SANGRE ENTERA

 

Principio

El Factor VIII de la coagulación puede concentrarse a partir de plasma fresco por precipitación en frío. Esto se logra mediante el descongelamiento lento de plasma fresco congelado (PFC) a 11°-6°C.¹

Materiales

1. PFC (= 200 mL), con al menos una bolsa de transferencia adosada.
2. Clips metálicos y sellador manual 
3. Instrumentos limpios (tijeras, pinzas hemostáticas, etc).
4. Sellador dieléctrico (opcional).
5. Extractor de plasma. 
6. Centrifuga refrigerada. 
7. Equipo de congelamiento Incluyen: a. congeladores mecánicos o hidráulicos capaces de mantener las temperaturas a -18 °C o inferiores. b.  hielo seco c.  Un baño de hielo seco con etanol. En un baño de etanol al 95% e hielo triturado seco, el congelamiento se completa en alrededor de 15 minutos.
8. Baño de agua circulante de 1°C a 6 °C o un refrigerador.
9. Balanza.¹ 

Procedimiento 

1. Permitir que el PFC se descongele a 1-6 °C ubicando la bolsa en un baño de agua circulante de 1 a 6 °C o en un refrigerador. Si se descongela en un baño de agua circulante, utilizar un cobertor plástico (u otro medio) para mantener los puertos secos.
2. Cuando el plasma tenga una consistencia viscosa, separar el líquido plasma del crioprecipitado mediante uno de los siguientes procedimientos:

• a) Centrifugar el plasma a 1-6 °C a alta velocidad a 5000 x g durante 5 o 7 minutos. Colocar la bolsa en posición invertida y dejar que el plasma separado fluya rápidamente dentro de una bolsa de transferencia; dejar que el crioprecipitado se adhiera a los lados de la bolsa primaria. Separar el crioprecipitado del plasma rápidamente, para evitar que se disuelva y salga fuera de la bolsa. Se pueden dejar de 10 a 15 mL de plasma sobrenadante en la bolsa para resuspender el crioprecipitado luego del descongelamiento. Volver a congelar el crioprecipitado en forma inmediata.
•  b) Colocar el plasma descongelado en una prensa plasma cuando aproximadamente un décimo del contenido esté todavía congelado. Con la bolsa en posición derecha, permitir que el plasma sobrenadante fluya dentro de la bolsa de transferencia utilizando como filtro los cristales de hielo de la parte superior de la bolsa. La pasta de crioprecipitado se adhiere a los lados de la bolsa o al hielo. Sellar la bolsa cuando aproximadamente el 90% del plasma pobre en crioprecipitado haya sido retirado. Recongelar el crioprecipitado inmediatamente. 

      3. Se debe congelar nuevamente el crioprecipitado dentro de 1 hora de descongelado. Almacenar               a -18 °C o temperaturas inferiores, preferentemente a-3°C, hasta 12 meses a partir del día en que            se extrajo la sangre.¹

Figura 5. Crioprecipitado

Disponible:http://intranet.cruzrojavalle.org.co/dctos_iso/open_archivo.php?id=3096&&Cod_Proceso=41

MÉTODO PARA CRIOPRESERVACIÓN DE GLÓBULOS ROJOS USANDO GLICEROL EN ALTA CONCENTRACIÓN - MÉTODO MERYMAN

Principios

Los agentes crioprotectores hacen posible la conservación a largo plazo (10 años o más) de los glóbulos rojos en estado de congelación. La alta concentración de glicerol es particularmente adecuada para este propósito. A continuación, se describe un método práctico para glóbulos rojos (GRD) extraídos en una bolsa de 450 mL.

Materiales

 1. Sangre entera extraída en citrato-fosfato-dextrosa (CFD), citrato-fosfato-dextrosa-dextrosa (CF2D), citrato fosfato-dextrosa-adenina-1 (CFDA-1) o una solución aditiva (AS por sus siglas en inglés):

a) Completar el procesamiento de la sangre en las Unidades destinadas para congelamiento. b) Los GRD conservados en CFD, CF2D y CFDA-1 pueden almacenarse a 1-6 QC hasta 6 días antes del congelamiento.

c) Los GRD preservados en A-1 y AS-3 pueden almacenarse a 1-6 QC hasta 42 días antes del congelamiento.

d) Los GRD que serán rejuvenecidos pueden ser procesados para congelamiento hasta 3 días luego de su fecha de vencimiento original.

e) Los GRD en cualquier solución de conservación y que hayan entrado para procesamiento deben ser congelados dentro de las 24 horas después de la apertura.

2. Las bolsas de almacenamiento pueden ser bolsas de cloruro de polivinilo o de poliolefina.

3. Solución de lactato de glicerol 6,2 M (400 mL).

4. Canastos de cartón o metal para congelamiento.

5. Solución hipertónica de CINa (12%)

6. CINa al 1,6%, 1 litro para cada ciclo de lavado.

7. NaCl isotónico (0,9%) con solución dextrosa al 0,2%.

8. Baño de agua a 37 °C o calor seco a 37 °C.

9. Equipamiento para lavado por flujo continuo o por grupos, para desglicerolar las células congeladas en una alta concentración de glicerol.

10. Cinta adhesiva para congelamiento

11. Congelador (-65 QC o temperaturas inferiores)

Procedimiento

Preparación de los GRO para el agregado de glicerol

1. Preparar los GRD a partir de unidades de sangre entera mediante la remoción de la solución conservadora anticoagulante sobrenadante o de la solución aditiva. Pesar la unidad de GRD a ser congelada, y obtener el peso neto de los glóbulos rojos. El peso combinado de los glóbulos y la bolsa de recolección deberá estar entre los 260 y 400 g.

2. Las unidades por debajo de ese peso pueden llevarse a aproximadamente 300 g con el agregado de NaCl al 0,9% o mediante la remoción de menor volumen de plasma que el habitual. Registrar el peso, y cuando corresponda, documentar la cantidad de ClNa agregada.

3. Registrar el número de unidad de la sangre entera, el grupo ABO y el tipo Rh, el anticoagulante, la fecha de extracción, de congelamiento y de vencimiento y la identificación de la persona que realiza el procedimiento. Si corresponde, registrar el número de lote de la bolsa de transferencia.

4. Calentar los glóbulos rojos V el glicerol hasta por lo menos 25°C colocándolos en una cámara de calor seco durante 10 a 15 minutos o permitiendo que éstos permanezcan a temperatura ambiente durante 1 a 2 horas. La temperatura no debe exceder los 42 °C.

5. Colocar la etiqueta "Glóbulos rojos congelados" en la bolsa de congelamiento en la cual la unidad será congelada. La etiqueta también debe incluir el nombre de la institución que congela la unidad, número de la unidad de sangre entera, grupo ABO y tipo Rh, la fecha de recolección, de congelamiento y de vencimiento y el agente crioprotector utilizado.

Agregado de glicerol

1. Documentar los números de lote de glicerol, las bolsas para congelamiento y si se utiliza, el del NaCl al 0,9%.

2. Colocar la bolsa de glóbulos rojos en un agitador y agregar aproximadamente 100 mL de glicerol mientras los glóbulos rojos se agitan con suavidad.

3. Apagar el agitador y dejar que las células se equilibren sin agitación durante 5 a 30 minutos. 4. Permitir que las células parcialmente gliceroladas fluyan por gravedad dentro de la bolsa de congelamiento.

5. Agregar los 300 mL de glicerol restantes lentamente, agitando con suavidad. Agregar volúmenes más pequeños de glicerol para volúmenes menores de glóbulos rojos. La concentración final de glicerol es de 40% p/v. Eliminar todo el aire de la bolsa.

6. Permitir que algunas células gliceroladas fluyan de nuevo dentro de la tubuladura para que se puedan preparar los segmentos. Preferentemente se deben preparar dos segmentos para que la unidad pueda ser cruzada y/o fenotipada antes del descongelamiento.

7. Mantener las células gliceroladas a temperaturas entre los 25°C y 32 °C hasta el congelamiento. El intervalo recomendado entre la remoción de la unidad de GRD del refrigerador y la colocación de las células gliceroladas en el congelador no debe exceder las 4 horas.

Congelamiento y almacenamiento

1. Colocar la unidad glicerolada en un recipiente de cartón o metal, y ubicarlo en el congelador a -65 °C o a temperaturas inferiores.

2. Etiquetar el borde superior del recipiente con cinta adhesiva para congelar con el número de la unidad de sangre entera, grupo ABO, tipo Rh, y la fecha de vencimiento.

3. No agitar ni manipular las células congeladas en forma brusca.

4. La velocidad de congelamiento debe ser inferior a 10 minutos.

5. Almacenar los GRD congelados a - 65 °C o a temperaturas inferiores hasta 10 años. Para la sangre con fenotipos raros, el director médico del banco de sangre puede desear extender el período de almacenamiento. Se debe documentar la naturaleza inusual de tales unidades y la razón para retenerlas pasado el tiempo de almacenamiento de rutina.

Descongelamiento y remoción del glicerol

1. Colocar una bolsa de envoltura al contenedor de protección que contiene a las células congeladas, y colocarlas en un baño de 37 °C o bien en calor seco a 37 °C.

2. Agitar suavemente para acelerar el descongelamiento. El proceso demora por lo menos 10 minutos. La temperatura de los glóbulos rojos congelados debe ser de 37 °C.

3. Luego de que los glóbulos rojos hayan sido descongelados, utilizar un equipo diseñado para el lavado manual o un sistema mecánico de lavado de flujo continuo para quitar el glicerol de las células. Seguir las instrucciones del fabricante.

4. Registrar los números de lotes y los fabricantes de todas las soluciones y software utilizados. Aplicar una etiqueta de "Glóbulos rojos desglicerolados" a la unidad de transferencia, asegurarse de que la etiqueta incluya la identificación de la institución responsable de la recolección de sangre, de congelamiento y descongelamiento, el grupo ABO y Rh de los hematíes, el número de la unidad de sangre entera, la fecha y hora de vencimiento.

5. Diluir la unidad con una cantidad de solución hipertónica de CINa (12%) apropiada para el tamaño de la unidad. Dejar que se equilibre por. aproximadamente 5 minutos.

6. Lavar las células con CINa al 1,6% hasta que se complete la remoción del glicerol. Se requieren aproximadamente hasta 2 litros de solución de lavado.

7. Suspender los glóbulos libres de glicerol en CINa isotónico (0,9%) con dextrosa al 0,2%.

8. Llenar la tubuladura adosada en forma integral con una alícuota de glóbulos rojos sellados de tal manera que estará disponible para realizar pruebas de compatibilidad.

9. Se debe almacenar los GRD desglicero lados de 1 °C a 6 °C no más de 24 horas. (Se ha autorizado un sistema cerrado el cual permite el almacenamiento de los GRD de 1 °C a 6 °C durante 2 semanas. Este sistema requiere que el paso de la desglicerolización se realice mediante un sistema cerrado de acuerdo con las instrucciones del fabricante).

Figura 6. Dispositivo de microfluidos con membranas, para la desglicerolización de los glóbulos rojos

Disponible en: https://www.labmedica.es/hematologia/articles/294756530/criopreservacion-extiende-periodo-de-almacenamiento-de-la-sangre.html

MÉTODO PARA DESCONGELAMIENTO Y MEZCLAS (POOLING) DE CRIOPRECIPITADOS

Principios

El crioprecipitado debe ser descongelado rápidamente a 30-37 °C, pero no debe permanecer en este rango de temperatura una vez que el descongelamiento se haya completado. El siguiente método permite un rápido descongelamiento y mezcla de este producto.

 Materiales

1. Baño de agua circulante a 37 °C (los baños de agua diseñados para descongelar el plasma se encuentran disponibles en forma comercial, así como los aparatos de calor seco especialmente diseñados).

2. Puertos de entrada para la inyección.

3. CINa al 0,9 % estéril para inyección.

4. Jeringas y agujas.

Procedimiento

1. Cubrir el contenedor con una bolsa de plástico impermeable para evitar la contaminación de los puertos de entrada de las bolsas con agua no estéril, o utilizar un dispositivo para mantener las bolsas erguidas con los puertos de entrada por encima del agua. Colocar la bolsa en un baño de agua a 37 °C.

2. Resuspender el crioprecipitado descongelado cuidadosa y completamente, ya sea incorporándolo dentro de los 10 a 15 mL del plasma residual o agregando aproximadamente 10 mL de CINa 0,9%, Y resuspender con suavidad.

3. Mezclar insertando un puerto de inyección en el puerto de entrada de cada bolsa. Aspirar el contenido de una bolsa dentro de una jeringa, y después inyectar dentro de la siguiente bolsa. Usar un volumen en constante aumento para limpiar al máximo posible cada bolsa subsiguiente de todo crioprecipitado disuelto, hasta que todo el contenido se encuentre en la bolsa final.

Figura 7. Descongelamiento crioprecipitados

Disponible en: https://superatuenfermedad.com/c-sangre/crioprecipitado/

 

MÉTODO PARA REMOCIÓN DE PLASMA DE LOS CP (REDUCCIÓN DE VOLUMEN)

Principios

Mientras el almacenamiento óptimo de plaquetas requiere un volumen adecuado de plasma, algunos pocos pacientes que requieren terapia con CP pueden no tolerar una infusión intravenosa de grandes volúmenes. Los CP almacenados se pueden centrifugar retirándose la mayor parte del plasma antes de la transfusión, pero es esencial volver a resuspenderlas en forma apropiada. Las plaquetas deben permanecer a temperatura ambiente, sin agitación, durante 20 a 60 minutos antes de la resuspensión dentro del plasma restante. La transfusión debe llevarse a cabo dentro de las 4 horas a partir del momento en que se ha abierto el circuito de la bolsa de plaquetas. La reducción del volumen puede realizarse en CP individuales o en una mezcla de varias unidades. No existe consenso en cuanto a la velocidad óptima de centrifugación. Un estudio' encontró una pérdida del 35% al 55% de las plaquetas en varias unidades centrifugadas a 500 x g durante 6 minutos o a 2000 x g durante 10 minutos. Los autores recomiendan 2000 x g durante 10 minutos para evitar que una fuerza de centrifugación alta pueda dañar la bolsa. Un estudio de Moroff et al encontró un promedio de pérdida de plaquetas menor a 15% en 42 unidades centrifugadas a 580 x g durante 20 minutos.

Materiales

1. CP preparados

2. Clips metálicos y selladores manuales.

3. Tijeras, y pinzas hemostáticas.

4. Sellador dieléctrico (opcional).

5. Centrifuga, calibrada

6. Extractor de plasma

Procedimiento

1. Hacer la mezcla de plaquetas, si se desea, en una bolsa de transferencia, usando una técnica estándar. Los concentrados de plaquetas pueden necesitar reducción de volumen para receptores pediátricos. Las unidades obtenidas por aféresis pueden procesarse directamente.

2. Centrifugar a una temperatura entre los 20 °C Y 24 °C, mediante uno de los siguientes protocolos:

a. 580 x g durante 20 minutos.

b. 2.000 x g durante 10 minutos.

c. 5.000 x g durante 6 minutos.

3. Colocar la bolsa en el extractor de plasma sin provocar movimientos que alteren el concentrado en su contenido. Retirar todo, excepto 10 a 15 ml de plasma de unidades simples o algo más de volumen, proporcionalmente a partir de la obtención de la mezcla o componente preparado por aféresis.

4. Colocar la fecha de vencimiento en la bolsa, considerándolo como de 4 horas después de abiertas.

5. Dejar la bolsa a una temperatura entre los 20 °C Y los 24 °C sin agitar, durante 20 minutos si se centrifuga a 580 x g, o 1 hora si se centrifuga a 2000 o 5000 x g.

6. Resuspender las plaquetas

 

Figura 8. Concentrado Plaquetario (CP)

Disponible en: http://hemoderivadosm8.blogspot.com/2012/10/hemoderivados.html 

MÉTODO PARA REJUVENECIMIENTO DE GLÓBULOS ROJOS

 

Principios 

El rejuvenecimiento es un proceso para restaurar los metabolitos que se han perdido y mejorar la función y sobrevida postransfusional de los glóbulos rojos almacenados. La solución de rejuvenecimiento no está destinada a la administración endovenosa. Luego de una incubación a 37 °C en la solución, las unidades de glóbulos rojos (GRD) pueden ser gliceroladas para ser conservadas congeladas o lavadas y mantenidas entre 1 a 6 °C para ser transfundidas dentro de las 24 horas. 

La solución de rejuvenecimiento aprobada por la FDA contiene piruvato, inosina, fosfato y adenina. Se permite su uso sólo con GRD preparados de sangre entera extraída en citrato-fosfato-dextrosa (CFD), citrato-fosfato-dextrosa-dextrosa (CFD2), o citrato-fosfato-dextrosa-adenina-1 (CFDA-1). Se puede agregar la solución en cualquier momento a partir de los 3 días de la fecha de extracción de la sangre hasta 3 días luego de la fecha de expiración de la unidad. Sin embargo, el uso de la solución de rejuvenecimiento en unidades de GRD antes de los 14 días de almacenamiento no se realiza rutinariamente dado que las células pueden desarrollar niveles muy elevados de 2, 3-difosfoglicerato, lo que perjudica la captación de oxígeno. 

 

Reactivos y materiales 

1. GRD almacenados entre 1 y 6 °C y preparados a partir de sangre entera recogida en CFD, CF2D, o CFDA
2. Luego de la extracción se pueden utilizar los GRD resuspendidos en CFD desde el día 3 al 24 (o en CFDA-1 desde el día 3 al 38). Los GRD conservados en solución aditiva 1 (AS-1) pueden ser rejuvenecidos, pero almacenados congelados sólo por 3 años. La solución de rejuvenecimiento no se encuentra aprobada por la FDA para los glóbulos preservados en CF2D, AS-3 y AS-5. Sin embargo, se ha descrito una adecuada viabilidad post-rejuvenecimiento de glóbulos rojos en dichas soluciones aditivas. 
3. Solución de rejuvenecimiento de glóbulos rojos, en un frasco estéril de 50 mL 
4. Bolsa plástica impermeable.
5. Clips metálicos y sellador manual. 
6. Conducto de entrada de aire estéril. 

Procedimiento 

1. Conectar el contenedor de la solución de rejuvenecimiento a los GRD mediante un equipo de transferencia y técnicas asépticas. Permitir que 50 mL de la solución de rejuvenecimiento fluya por gravedad dentro de la unidad de glóbulos rojos. Agitar suavemente la mezcla de solución. Tener en cuenta que es necesario utilizar el conducto de aire estéril cuando la solución se encuentra en un frasco.
2. Sellar la tubuladura cerca de la bolsa de sangre e incubar la mezcla durante 1 hora a 37° C. Se puede utilizar un incubador con calor seco o un baño circulante de agua. Si se coloca en un baño de agua, se debe sumergir la unidad completamente; la utilización de una bolsa impermeable que la cubra es esencial para evitar la contaminación. 
3. Para usar dentro de las 24 horas, lavar las células rejuvenecidas con solución fisiológica de 2L (cloruro de sodio (ClNa) al 0,9 % no tamponado) mediante el uso de un protocolo aprobado. El almacenamiento de los glóbulos rojos lavados desde el comienzo del proceso de lavado debe ser de 1° a 6°C durante no más de 24hs.²
4. Si los glóbulos rojos rejuvenecidos van a ser criopreservados, el protocolo de rutina para agregarles glicerol indica la remoción en forma adecuada de la solución de rejuvenecimiento. La fecha de vencimiento de los GRD congelados es de 10 años a partir de la fecha de extracción.
5. Asegurarse que las unidades sean adecuadamente etiquetadas y que se completen todos los registros. 

BIBLIOGRAFÍA

Roback, J. Grossman, B.Harri, T. Hillyer, C, editors. En: American Association of Blood Banks, Asociación Argentina de Hemoterapia e Inmunohematología. Manual técnico AABB. 17th ed;2012. p: 1109-1126