GUÍA TIPIFICACIÓN DEL SISTEMA ABO Y RH

 Generalidades

En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos que representan los llamados grupos o factores sanguíneos Fue Landsteiner quien realizó en 1900 el importante descubrimiento de que los eritrocitos del hombre pertenecen a varios sistemas Antigénicos diferentes, este autor descubrió el sistema A B O.

 La clasificación del grupo sanguíneo está, determinada por la presencia o ausencia de los aglutinógenos en el eritrocito y las  aglutininas en el suero. Para la identificación del grupo sanguíneo ABO se deben hacer dos investigaciones consecutivas: la primera se llama tipado globular y es la determinación de los aglutinógenos eritrocíticos con antisueros o aglutininas conocidas, la segunda se llama tipado sérico o contratipado y es la identificación de las aglutininas utilizando glóbulos rojos con antisueros conocidos.

Tipificación en tubo.

Reactivos

• Suero anti A (de sangre b), de color azul y que contiene aglutininas alfa.
• Suero anti B (de sangre a), de color amarillo y que contiene aglutininas beta.
• Suero, el anti AB que contiene las dos aglutininas, alfa y beta.(opcional)

Fundamento

Los antígenos de los hematíes son estructuras químicas que proporcionan propiedades específicas a su superficie y que solo pueden detectarse con anticuerpos que corresponden a esos antígenos la mayoría de estas reacciones antígeno-anticuerpo implican la aglutinación o hemólisis de los hematíes.

Material y equipo

• 1 gradilla
• 16 tubos 10 x 75
• 4 tubos 13 x 100
• 4 pipetas Pasteur con  bulbo
• Centrifuga clínica
• Centrífugas Serofuge
• Sueros hemoclasificadores Anti-A, Anti B. Anti-AB
• Albúmina bovina al 22% o 33%
• Solución fisiológica en Pizeta
•  Sangre problema

Procedimiento:

1. Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 5%, previamente lavado en solución fisiológica.
2. En una gradilla colocar 4 tubos de ensayo de 10 x 75, marcados con las letras A, B, AB y Control.
3. En cada tubo poner una gota de suspensión de glóbulos rojos al 5%.
4. En el tubo marcado con A poner una gota de suero anti A, en el tubo marcado con B, poner una gota de suero anti B, en el tubo AB una gota de suero anti AB
5. Se debe hacer un control agregando a 1 tubo con una gota de albúmina bovina al 22 %
6. Mezclar perfectamente los tubos y dejar reposar por dos minutos.
7. Mezclar nuevamente y se procede a centrifugar a 2,500 r p m durante un minuto
8. Se sacan los tubos cuidadosamente de la centrifuga evitando que se mezclen los glóbulos rojos que quedan depositados en el fondo de los tubos y para efectuar la lectura se sacuden cuidadosamente el botón del fondo, uno por uno buscando si existe aglutinación macroscópica.
9. Si la aglutinación tuvo lugar, puede comprobarse en el seno del líquido claro los hematíes que nadan y se flotan formando pequeños agrupamientos, si el resultado es negativo los glóbulos rojos se distribuyen uniformemente por el líquido.
10.  El resultado se reporta de acuerdo a la intensidad del grupo y al color del  líquido sobre nadante, de una o varias cruces, hasta cuatro.
11.  Si existe duda en la lectura se podrá observar al microscopio una gota o también se pueden incubar los tubos a 37° C. durante 30 minutos.

Contratipado sanguíneo o prueba de Wiener

Al contrario de las: pruebas anteriormente descritas que emplean sueros testigos, esta prueba utiliza glóbulos rojos testigos tipo A, B y AB en suspensión al 5% y suero de la persona a clasificar la prueba puede realizarse en tubo, de acuerdo con las técnicas antes descritas

Interpretación de resultados

Grupo sanguíneo aglutinación en tubo

	Anti A	Anti-B	Anti AB
Grupo A	Positivo	Negativo	Positivo
Grupo B	Negativo	Positivo	Positivo
Grupo AB	Positivo	Positivo	Positivo
Grupo O	Negativo	Negativo	Negativo

Es recomendable que la tipificación al  realizarse, los resultados son más confiables tubo, ya que la aglutinación se puede expresar en cruces, de una a cuatro, dependiendo del grado de la misma.

• 4 cruces; la aglutinación se presentará como un botón sólido con fondo claro y grumos gruesos.
• 3 cruces; la aglutinación serán varios grumos grandes con el fondo claro o rosado
• 2 cruces pocos grumos y muy pequeños,  una suspensión uniforme
• 1 cruz pocos grumos, muy pequeños, el fondo muy rosado.
• Negativo: Una suspensión uniforme de color rojo.

Error en la preparación

La suspensión de glóbulos rojos así si se ha colocado demasiada sangre (mezcla de color rojo intenso) en exceso de glóbulos rojos puede absorber la aglutinina del suero y no evidenciar la aglutinación.

Si se ha colocado poca sangre (La mezcla color rosa muy pálido) la escases de glóbulos dificultará la lectura  macroscópicamente.

Con respecto a los sueros hemoclasificadores:

• Pueden estar envejecidos, mal preparados y su potencia débil. contaminado control de calidad se observa turbio y de mal olor.
• Con respecto a las sangres: sangres viejas o contaminadas con bacterias.

Con respecto a la manipulación

• Rotulación equivocada de los tubos
• Colocación errónea de los reactivos
• Equivocación en los reportes.

Tipificación del subgrupo de “A” uso de Lectina A1

Generalidades

Los eritrocitos que poseen antígeno A pueden ser subdivididos en Al y A2, las células rojas del grupo A que aglutinen con Anti Al lectina, se consideran del subgrupo, aquellas que no aglutinan con Anti A1 lectina, se clasifican como A2. Aproximadamente el 80 % de las células, son Al y el restante 20% se consideran A2.

Método en tubo.

Fundamento

Los procedimientos usados con este reactivo, están basados en el principio de aglutinación, las células humanas normales, conteniendo antígenos se aglutinan en presencia del anticuerpo del antígeno correspondiente algunos extractos de semillas lectina contienen aglutininas con especificidad de grupos sanguíneos humanos, el extracto de la semilla dolichus biflorus es virtualmente específica para el antígeno. Al en células rojas humanas contiene un fito hemo aglutinina, la cual como se dijo anteriormente aglutina las células rojas de los subgrupos Al o A1B.

Material y equipo:

• 1 gradilla
• 4 tubos ensayo 10 x 75
• 2 pipetas Pasteur con bulbo
• 1 centrifuga clínica o Serofuge
• Suero Anti-Al lectina
• Solución salina en pizeta.

 Procedimiento

1. Preparar una suspensión de glóbulos rojos en solución salina al 5%
2. Colocar una gota de Anti A Lectina en un tubo de 10x 75
3. Con una pipeta Pasteur, agregar una gota de la suspensión de glóbulos rojos.
4. Mezclar bien y centrifugar a 2500 rpm por un minuto.
5. Resuspender los glóbulos rojos cuidadosamente y examinar el tubo en busca de aglutinación.

Interpretación.

1. Cuando los glóbulos rojos son aglutinados la reacción es positiva e indica la presencia de antígeno A1 y por lo tanto los glóbulos rojos son A1
2. Cuando los glóbulos rojos no aglutinan, la reacción es negativa e indica la ausencia de antígeno A1 y los glóbulos rojos son A2
3. Cuando se investiga en una sangre AB, con Antia Al lectina, si aglutina es AlB, si no aglutina es A2B 

No se requiere preparación especial del paciente previo a la recolección de los especímenes, puede usarse sangre recolectada con o sin Anticoagulantes. Las  muestras de sangre deben ser analizadas lo antes posible después de la obtención. Si el análisis tiene que ser retrasado, las muestras deben conservarse bajo refrigeración entre 2 y 8° C.

Los glóbulos rojos recolectados y conservados en citrato de sodio, oxalato de amonio; con oxalato de potasio han de mostrado que mantienen su reactividad por 28 días. Los glóbulos rojos recolectados y conservados con sangre coagulada o en citrato de sodio u oxalato de sodio, han demostrado su reactividad por lo menos durante 14 días; si los hematíes se recolectan sobre EDTA o heparina, éstas deben ser analizadas dentro de las 48 horas. 

Limitaciones del procedimiento

• Todas las pruebas usando antisuero hemoagrupadores ABO, deben ser llevadas a cabo a temperatura ambiente y nunca incubarse a temperaturas más elevadas,
• El antígeno al no es totalmente expresado en células rojas de recién nacidos y  pueden obtenerse falsos negativos
• Glóbulos rojos de más de 28 días pueden ser probados con este reactivo aun cuando las reacciones positivas pueden ser más débiles que las obtenidas de glóbulos rojos frescos,
• Contaminación de los especímenes de sangro o de los materiales suplementarios usados, pueden interferir con los resultados de la prueba.

Tipificación del sistema factor Rhesus (Rh) 

Generalidades

Además de los Antígenos del sistema ABO, existe otro sistema de mayor importancia que es el factor Rhesus (Rh) 

 Landsteiner y Wiener descubrieron en 1990 la existencia de un aglutinógeno en los glóbulos rojos humanos que llamaron factor Rh, a fin de recordar con las dos iniciales del mono Rhesus.  El mecanismo que permitió ponerlo en evidencia fue el inyectar glóbulos rojos lavados de dicho animal (Macacus Rhesus) en conejos, obteniéndose de este modo un suero capaz de aglutinar un 85% de los hematíes humanos.

El suero de conejo preparado en la forma indicada contenía la aglutinina correspondiente al factor Rho y se denominó Anti Rho, las personas cuyos glóbulos rojos eran aglutinados por el suero Anti Rho se denominaron Rh positivos, y los hematíes no eran aglutinados por el suero Anti Rho se denominaron Rh negativos, se comprobó que el 85% de las personas de raza blanca son Rh positivos y que el 15% restantes son Rh negativos, posteriormente se descubrió que el factor Rh no era el único, sino que se trataba de un factor muy complejo  por tanto existen tres factores principales:

• El rir(nomenclatura de Wiener) o d (nomenclatura de Fisher race).
• El rh1 (nomenclatura de Wiener) o c (nomenclatura de Fisher race).
• El r1r» (nomenclatura de Wiener) o e (nomenclatura de Fisher race).
• Levine y Stetson describieron un caso de inmunización materno fetal en el segundo embarazo de una mujer que dio a luz un feto muerto.

 La presencia del Anticuerpo inmune se comprobó al transfundirle sangre del esposo, compatible con el sistema ABO, con la que reaccionó violentamente, esto hizo suponer que la madre había elaborado Anticuerpos contra un Antígeno poseído por el feto, que a su vez había heredado del padre, esto hizo evidenciar la presencia de otro tipo de Anticuerpo que no tenía nada que ver con los del sistema ABO y así descubrió el factor Rho-

El sistema sanguíneo rh-hr está formado por un grupo de antígenos de naturaleza proteica la transfusión de glóbulo rojos con estos factores, a pacientes que no los tengan, pueden dar lugar a la formación de Anticuerpos específicos estos Anticuerpos pueden ser la causa de reacciones post transfusionales severas o casos de inmunización materno fetal produciendo una anemia hemolítica por defectos extra corpusculares ya que los Anticuerpos maternos actúan sobre los glóbulos rojos normales;     además de los ya descritos, existen otros, pero el más importante se le llama factor Rh o factor du.

Método en tubo:

Fundamento

El factor Rho. es un antígeno que se encuentra en la membrana del eritrocito el cual reacciona con su Anticuerpo correspondiente que se encuentra en el suero anti-D que contiene la aglutinina correspondiente al factor Rho, llamado también anti Rho, anticuerpos que se detectan, son del tipo de la IgG que poseen la capacidad de cruzar la barrera placentaria por su bajo peso molecular, iniciando por tanto la enfermedad.  La presencia del factor Rho se pone de manifiesto mediante una reacción antígeno-anticuerpo y se observa por aglutinación y hemólisis.

Material y equipo:

• 1 gradilla
• 4 tubos 10 x 75
• 4 tubos 13 x 100
• 4 pipetas Pasteur con bulbo
• Centrifuga  Serofuge
• Suero Anti-D
• Antiglobulina humana
• Solución Salina en pizeta
• Baño maria a 37oC 

Procedimiento

 Se prepara una suspensión de glóbulos rojos en solución fisiológica al 5%

1. En un tubo de ensayo 10 x 75, se coloca una gota de suero  anti Rho (D) y se le agrega una gota de suspensión de los eritrocitos problema al 5%
2. Se homogeniza con un movimiento suave, se centrifuga a 3,500 rpm- durante 30”
3. Se realiza la lectura, en busca de aglutinación, en caso de duda se incuba durante 15’ al cabo de este tiempo se efectúa lectura, suspende suavemente el sedimento.
4. Nuevamente se centrifuga durante 30″ a 3,500 r.p.m. se rea liza la lectura
5. Se observa aglutinación con grumos  visibles, si hay duda se confirma la lectura mediante observación microscópica.

Interpretación de resultados.

• Si la sangre examinada Rho. positiva se nota la formación  grumos fácilmente observables a simple vista.
• En caso de ser Rho. negativo el aspecto es homogéno, no existe aglutinación.

Determinación de antígeno Du

Generalidades

El  Du, es un alelo de D, muy importante pero irregular. No existe suero anti-Du específico. Algunas sangres Du deben esta característica al hecho de que el factor D normal heredado, de uno de los padres, está enmascarado por el factor C de un cromosoma aparejado dCe (r´) heredado de otro progenitor: este tipo se conoce como “Du por interacción genética”. El otro tipo “Du hereditario” puede atribuirse a transmisión de un D debilitado.

 Los glóbulos de algunos sujetos Du pueden ser aglutinados directamente por casi todos los sueros anti D, estos casos se denominan ”Du” de título  elevado”. Otras sangres Du son aglutinados solamente por unos cuantos sueros anti D; son los “Du de título bajo”. Lo importante respecto a los  glóbulos Du, especialmente la variedad  “título bajo”, es que probablemente parecerán Rho. Negativos al ser mezclados con anti D. Solamente podrán reconocerse mediante:

• Modificación enzimática previa, o sea, ficnización
• Exposición previa al suero anti D incompleto y luego prueba de Coombs. Los glóbulos Du dan una prueba de Coombs positiva en estas circunstancias. Se recomienda el segundo método.

Otra consideración todavía más importante respecto al Du, es que todos los que poseen el alelo Du deben considerarse como donadores Rho. Negativos. Esto se debe a que el Du puede producir anti D en un sujeto Rho. Positivos, pero receptores Rho. Negativos. Esto se debe a que el Du puede producir anti D en un sujeto Rho. Negativo, y también a que algunos Du producen ellos mismos anti D. Además los sujetos Du por “acción intergenética” no deben recibir sangre  que contenga el antígeno c, muy potente, en otras palabras, debe recibir sangre del genotipo Dce/dCe o DuCe/dCe esta última generalmente corresponde  a su propio genotipo. 

Método en tubo

Fundamento

Ciertos eritrocitos Rho.+, alrededor del 1% con mayor frecuencia en la raza negra que en la caucásica, no son aglutinados por el suero anti Rho. (anti D) pero después de ser expuesto a los anticuerpos Rho. (D), darán una reacción positiva si se tata con suero de Coombs.

Generalidades:

Los hematies del grupo D presentan diferencias en cuanto a su reactividad; se acepta que varios de los factores del sistema Rho. En ocasiones se expresan en forma débil o incompleta los más importantes son: el Du, el Cw y el Eu en realidad solo el Du tiene importancia en el banco de sangre debe sospecharse de ser Du, las sangres que son difíciles de clasificar como Rh positivos o negativos, utilizando solo el suero anti-D

El paciente Du positivo debe recibir sangre Du negativa ya que se han reportado casos que por recibir sangre Rho. positiva desarrollan anticuerpos Anti Rho. de especificidad Anti-D, el factor Du de Stratton, como es débil no es fácil determinarlo, pero conserva su capacidad antigénica. Para investigar este grupo, la técnica de aglutinación con el suero Anti-D ha dado resultados débiles, sin embargo ha servido para que los Anticuerpos se fijen y la prueba de Coombs indirecta nos dará el resultado positivo; observando macroscópicamente el fenómeno de aglutinación: el Antígeno Du se determina por la aglutinación de los glóbulos rojos en presencia del suero Anti-D y  Antiglobulina  Humana 

Material y equipo

• 1 gradilla
• 4 tubos 10 x 75
• 2 pipetas pasteur con bulbo
• 1 Centrifuga Sarofuge
• 1 baño maria a 370c
• Suero Anti-D
• Suero de Coombs
• Albúmina bovina al 22%
• Solución salina en pizeta

 Procedimiento

1.  Preparar glóbulos Rho. negativos al 5%
2. Marcar dos tubos No 1 problema y No 2 control, agregar en cada tubo dos gotas de la suspensión de glóbulos rojos.
3. Al tubo No 1 agregar una gota de suero Anti-D y una gota de Albúmina bovina al 22%, al tubo No 2 dos gotas albúmina bovina al 22%
4. Mezclar y dejar reposar durante dos minutos
5. Centrifugar en busca de aglutinación
6. Lavar por tres ocasiones
7. Despues del último lavado, decantar completamente y agregar dos gotas de Antiglobulina humana a cada tubo
8. Incubar durante 15 minutos a 37° C
9. Centrifugar a 3,500 rpm x 1 minuto
10. 10.Leer sobrenadante y despegar el boton del fondo del tubo cuidadosamente en busca de aglutinación
11. .Reportar por escrito

Interpretación de resultados

• En el tubo control no debe encontrarse aglutinación.
• Si el tubo problema se observa con aglutinación se habla de la presencia del factor Du.
• Si hubiese aglutinación en los dos tubos significa que se trata de glóbulos rojos cubiertos o bloqueados, por lo tanto si se trata de  donador la sangre será desechada

Dosificación de Hemolisinas 

Generalidades

La hemólisis inmunológica debida a la acción conjugada de dos factores, un anticuerpo específico  de los glóbulos rojos, el complemento, el anticuerpo correspondiente es denominada hemolisina.

El primer paso en la reacción es la unión del anticuerpo con el antígeno sobre la membrana del eritrocito, la unión con su anticuerpo homólogo inicia entonces la secuencia del complemento que produce la lesión lítica. La sensibilidad óptima de un glóbulo rojo parece requerir aproximadamente 1000 moléculas de anticuerpo, pero requerimiento mínimo en una sola molécula de IgM o dos moléculas de IgG muy próximas, se ha observado que la cantidad del complemento necesaria para la hemólisis completa de determinado número de células, está inversamente relacionada con la cantidad de anticuerpo suministrada.

Las isohemolisinas naturales son muy poco frecuentes, se ha señalado en algunos de los sistemas de grupos sanguíneos las isohemolisinas inmunes se observan después de inyectar sangre incompatible.

Las autohemolsimas bitermicas se ven en la hemoglobinuria paroxistica por enfriamiento; son globulinas anormales del suero, capaces de hemolizar los glóbulos rojos del paciente mismo y de otras personas, se combinan los eritrocitos a temperaturas inferiores a los 20°C y no lo hacen por arriba de esta temperatura, cuando aumenta a 25°C empieza la hemólisis, que es óptima a los 40°C las autohemolisinas monotérmicas con un margen de temperatura de 15 a 30°C, son causa de una destrucción excesiva de hematíes, anemias hemolíticas, el complemento es termolábil y se destruye a 56°C, de 20 a 30 minutos el almacenamiento a 4°C significa pérdida de ésta actividad de 2 a 3 días.

Un anticuerpo puede reaccionar primero como hemolisina, pero si se inactiva o fija el complemento, reacciona como aglutinina.

La presencia de hemolisinas en el suero de un donante del grupo «O» indica que esa sangre solo puede ser transfundida a otro paciente del mismo grupo.

Fundamento

Se basa en la activación del complemento por la formación del complejo antígeno – anticuerpo, entre el antígeno de superficie del eritrocito y la hemolisina, poniendo suero problema ante suspensiones de glóbulos rojos «A» y «B». Se puede determinar el título de hemolisinas mediante diluciones del suero problema.

Material y equipo

• 1 gradilla
• 6 tubos10 x 75
• 3 pipetas Pasteur c/bulbo
• 3 pipeta 1/10
• 1 centrifuga Serofuge
• Solución salina normal
• Suero problema
• Glóbulos rojos «A»y «B»

Procedimiento

1. Preparar suspensiones al 5% en solución salina de Eritrocitos  «A» y «B»
2. Marcar dos tubos con las letras A y B que corresponden al tipo sanguíneo
3. Depositar 0.1 ml de la suspensión de eritrocitos de cada grupo al tubo que corresponda
4. Añadir a cada tubo 0.1 ml de suero problema
5. Centrifugar a 2,500 rpm, durante 2 minutos
6. Observar si existe hemólisis en el sobrenadante de cada tubo, en caso de duda volver a centrifugar los tubos y reportar por escrito

Interpretación de resultados:

• Si a pesar de la centrifugación los glóbulos rojos no se sedimentan y el liquido del tubo es rojo, indica que los glóbulos rojos se han hemolisado
• El suero de un donador «O» con hemolisinas, solo se aplicará a un receptor del mismo grupo, no se utilizará con pacientes «A» o «B «
• Si el suero de una madre «O» hemolisa los glóbulos rojos de su hijo con eritroblástosis, es el causante de la isosensibilización de la madre

Las muestras de sangre utilizadas en el estudio del complemento, de preferencia deben manejarse a temperatura ambiente (22°C) debe separarse el suero del coagulo lo más pronto posible, para prevenir la pérdida de actividad del complemento.

Dosificación Aglutininas

Generalidades

El sistema ABO es el único sistema en el que el plasma y suero inactivado, contienen aglutininas que reaccionan con factores sanguíneos presentes en los eritrocitos de otras personas. Las isoaglutininas responsables de la aglutinación en el sistema ABO son del llamado completo, lo cual quiere decir que la adherencia del Ac al eritrocito que tiene factor sanguíneo homólogo, va seguido automáticamente del antígeno.

 En casos de urgencia o escases del tipo sanguíneo necesario para una transfusión se empleará sangre tipo o llamada comúnmente «donador universal», por carecer sus eritrocitos de aglutinógenos; pero si existen en el plasma aglutininas alfa o beta, que pueden presentar casos de aglutinación a los receptores, en los casos de títulos elevados. Hay que tomar precauciones, el riesgo de que las isoaglutininas transfundidas dañen a los hematíes del receptor, se podrán realizar este tipo de transfusiones sin peligro alguno, si se cumple con las siguientes normas:

1. El plasma de la sangre que ha de emplearse no de be contener aglutininas para los hematiés del futuro receptor
2. El título de isoaglutininas reactivas deberá ser inferior 1:80

La prueba cruzada menor debe realizarse con el suero neutralizado del donador, solo si esta prueba no da aglutinación, podrá emplearse la sangre sin riesgo. Sangre completa del «donador universal», para un receptor de otro grupo sanguíneo, los peligros relacionados con transfusiones de sangre de donadores universales, pueden reducirse al mínimo por la extracción parcial o completa del plasma.

En casos de transfusiones de urgencia, en las que es necesario reponer el vólumen sanguíneo perdido y no se puede esperar a practicar las pruebas cruzadas, se recomienda el uso de sangre «O» Rh negativa con títulos bajos de anti A y anti B y excenta de todos los anticuerpos irregulares.

Fundamento

Las aglutininas forman parte de los donadores universales. Para cuantificar el título de isoaglutininas, se cuantifica cualquier reacción de aglutinación de Anti A y Anti B que persista en una dilución de 1:80 deberá considerarse de titulo elevado, donador universal peligroso.

Material y equipo:

• Gradilla
• 24 tubos de 10 x 75
• 3 tubos de 13 x 100
• 10 pipetas de 0 1
• 5 pipetas pasteur
• 2 pipeta 1ml
• 1 centrifuga Serofuge
• 1 baño maria 37°C
• Suero o plasma problema
• Solución salina normal
• Glóbulos rojos «A» y «B»

Procedimiento

1. En la gradilla colocar 3 hileras de tubos de 10 x 75, de 8 tubos cada una, marcar los tubos de la primera hilera con: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1320, 1:640 y 1:1280,
2. Realizar diluciones del suero o plasma «O», poniendo 5 ml, de solución salina en cada uno de los tubos marcados, agregando 0 5m1, de suero o plasma del grupo «O» al primer tubo, mezclar y tomar 0,5 ml de esta suspensión y ponerla enel siguiente tubo y así sucesivamente hasta terminar desechando 0.5 ml de la suspensión final
3. Preparar suspensión de glóbulos rojos en solución salina al 5% de los grupos «A» y «B», en los tubos de ensaye 13 x 100
4. Añadir 0.1 ml de la suspensión preparada anteriormente de glóbulos rojos del grupo «A» a los tubos de la segunda hilera y 0.1 ml de la suspensión de glóbulos rojos del grupo «B» a los tubos de la tercera hilera
5. Depositar 0.1 ml de suero «O» diluido a cada uno de los tubos que contienen los glóbulos rojos «A» y «B» teniendo cuidado de marcar correctamente los tubos con la dilución que se emplee
6. Incubar todos los tubos «A» y «B» a 37°C por treinta minutos
7. Centrifugar a 2500 rpm durante un minuto
8. Remover suavemente los glóbulos rojos sedimentados, observando si existe aglutinación macroscópica, reportar la aglutinación en cruces hasta el último tubo en que se encuentre 

Interpretación de resultados:

• Se anotará la dilución a la que se observó la aglutinación en las dos hileras de tubos que contienen la sangre A y B
• Aglutinación más de 1:80 se considera de título elevado y por lo tanto solo transfundir a paciente con sangre de su mismo tipo o sangre  “O” pero solo concentrado eritrocitario.

Bibliografía

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1.	Henrriquez JBHE. Manual de Prácticas de Inmunohematología. [Online].; 2012 [cited 2021 03 07. Available from: https://www.uv.mx/personal/bescobar/experiencias-educativas/manual-de-practicas-de-inmunohematologia/.
2.	Grispan DS. GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh. [Online].; 2013 [cited 2021 03 07. Available from: http://www.bvs.hn/RMH/pdf/1983/pdf/Vol51-3-1983-6.pdf.

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