GUÍA PRÁCTICA PRUEBA CRUZADA MAYOR

 

OBJETIVO

Demostrar el procedimiento que se realiza en el laboratorio de Banco de Sangre mediante la grabación de un video con la finalidad de entender como se realiza la prueba cruzada mayor.

INTRODUCCIÓN

Entre las medidas de seguridad transfusional están aquellas encaminadas a evitar la reacción hemolítica aguda, es decir, las que aseguran la compatibilidad entre donante-receptor (1).

Aunque comprenden tanto normas pretransfusionales como para la administración de los CS en general, se definen como pruebas de compatibilidad las pruebas analíticas de laboratorio que se llevan a cabo para detectar posibles Ac en el receptor contra Ag en las células a transfundir. Estas incluyen diferentes estudios en el receptor, determinación de grupo y Rh, AI y en concreto, las denominadas Pruebas Cruzadas, que se llevan a cabo en determinados casos entre suero del receptor y células del donante (hematíes o plaquetas) e investigan la presencia de posibles Ac en suero mediante su reacción en diferentes medios físico-químicos (1).

Por la importancia de la reacción hemolítica en los casos de incompatibilidad eritrocitaria y la facilidad técnica para realizar las pruebas de compatibilidad con hematíes, estas se llevan a cabo de manera rutinaria en los casos de transfusión (1).

FUNDAMENTO:

Prueba cruzada mayor en medio salino, es una prueba de compatibilidad en medio salino que en 2-3 minutos determina la presencia de Ac, generalmente IgM, en el suero del paciente frente a los hematíes del CH. Comprueba la compatibilidad AB0, sin duda la más importante en transfusión (1).

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

•  Muestra sanguínea                       

• Centrifuga

• Tijera

• Tubos de vidrio

• Gradilla

• Rotulador

• Solución salina

• DiaLISS

• AH

• Coombs (control positivo)

• Pipetas Pasteur

• Toallita absorbente

PROCEDIMIENTO

1.- Se obtiene un segmento de manguera del concentrado de glóbulos rojos, se corta la punta y se coloca 2 gotas en un tubo previamente rotulado, se añade 2 ml de solución salina isotónica al 0.9%.

2.- Debemos lavar las células con solución salina por 3 ocasiones centrifugando por 1 minuto a 2100 RPM y eliminando el sobrenadante.

3.- A las células lavadas se coloca 2 ml de solución salina para formar una suspensión de glóbulos rojos del 3 al 5 % (solución cereza).

4.- Colocar 2 gotas de la solución cereza en un tubo previamente rotulado y se lo enfrenta con 3 el suero del paciente y se centrífuga a 15 segundos a 3000 RPM.

5.- Se Lee el resultado y si no hay hemolisis o aglutinación se coloca 2 gotas de DiaLiss y se incuba a 37°C por 10 minutos (se puede sustituir el reactivo DiaLiss por albúmina e incubar 20 minutos o en caso de no contar con estos reactivos incubar a 37°C por 40 minutos)

6.- Centrifugar a 3000 RPM por 15 segundos

7.- Leer, y en caso de no presentar hemolisis o aglutinación se coloca 2 ml de solución salina y se centrífuga a 2100 RPM y se lava las células por 3 ocasiones

8.- Luego de las 3 lavadas se elimina todo y se agrega 2 gotas de suero Coombs se centrífuga a 3000 RPM por 15 segundos

9.- Se saca el tubo y se lee, en caso de no presentar hemolisis o aglutinación el concentrado de glóbulos rojos será compatible para el paciente y podrá ser transfundido.

 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

La presencia de aglutinación o hemolisis en cualquiera de las fases constituye un resultado positivo de las pruebas e indica la presencia del anticuerpo dirigido contra el antígeno del donante (1).

Cuando se obtenga resultados positivos e incompatibles se debe pedir nueva muestra del receptor, una muestra de 10 ml sin anticoagulante, y una con anticoagulante EDTA de 5ml, para buscar unidades compatibles (1).

Tomado de: (1)

CAUSAS QUE ALTERAN LOS RESULTADOS DE LA PCM

 1) Error en la tipificación ABO y Rh (D) del donador, del paciente o de ambos.

 2) Aloanticuerpos:

• Pantallas positivas. Anticuerpos contra: Antígenos de alta incidencia.
• Mezcla de anticuerpos y antígenos de baja incidencia.
• Pantallas negativas: anti-A. 

3) Autoanticuerpos (autocontrol positivo)

 4) Autosensibilización de los eritrocitos del donante.

5) Anormalidades en el suero del paciente:

• Hipergammaglobulinemia (roleaux)

• Presencia de dextranos.

• Presencia de expansores del plasma 

6) Contaminantes

• Material sucio.
• Contaminación bacteriana de la muestra. 
•  Presencia de antisuero.
• Contaminación de la solución salina (1)

REFERENCIAS:

 1.  Tapia J. Reducción de la sobrecarga antigénica mediante la realización de la prueba cruzada mayor en fase salina cuando se presentan solicitudes transfusionales de urgencia, empleando las muestras de sangre de los pacientes atendidos en el servicio de emergencia del H.P.G.D.R. durante el periodo julio a noviembre del 2012 [Pregrado]. Universidad Nacional de Chimborazo; 2013.Disponible en: http://dspace.unach.edu.ec/bitstream/51000/1161/1/UNACH-EC-LAB.CLIN-2013-0034..pdf