El
avance científico y tecnológico de la inmunohematología ha conducido al
desarrollo de técnicas moleculares que permiten identificar la presencia o
ausencia de una secuencia genética que codifica para una proteína específica,
así como técnicas de citometría de flujo y western blot para evaluar la
expresión de un antígeno en la membrana eritrocitaria; sin embargo, dentro de
los nuevos conceptos debemos eliminar pruebas que no son esenciales, disminuir
costos, utilizar protocolos simples y seleccionar adecuadamente los métodos, la
temperatura, período de incubación y diferentes sustancias que aceleran y
modifican la reacción antígeno-anticuerpo: albúmina humana, bovina, bovina
polimerizada a 19, 22 y 30 por ciento. Enzimas como bromelina, fisina, papaína
y tripsina, LISS ( solución de baja fuerza iónica), columnas de gel,
polietilenglicol (PEG), polibreno.2 La prueba de compatibilidad es un ensayo in
vitro de lo que puede suceder en el paciente al recibir la transfusión de un
componente sanguíneo, por lo que es de suma importancia, ya que permite que los
antígenos y anticuerpos puedan ser detectados y estudiados en el laboratorio;
también ayuda a prevenir la transfusión de sangre incompatible, y provee al
paciente el máximo de seguridad y beneficio. La metodología varía según los
recursos del servicio y la urgencia del caso. Las técnicas en medio proteico y
con enzimas proteolíticas pueden ser útiles para la distinción de la
especificidad de un anticuerpo.
Antes de efectuar cada procedimiento es muy importante contar con un excelente control de calidad, el cual nos permite verificar todos los procesos y etapas que influirán en la detección de los anticuerpos, con lo que se podrán obtener resultados confiables y seguros.
Fuente imagen: https://images.app.goo.gl/H5sP8C1MkmXRBGC49
PRUEBAS CRUZADAS
Test de
laboratorio que se realiza previamente al trasplante, enfrentando el suero del
receptor prospectivo frente a células o linfocitos del donante, procedentes de
la sangre periférica, del ganglio o del bazo con el fin de detectar anticuerpos
preformados específicos y prevenir el rechazo hiperagudo. La positividad de
esta prueba se considera una contraindicación absoluta del trasplante.
Habitualmente
se efectúa con suero reciente, extraído del paciente unas horas antes del
trasplante y con una selección de sueros previamente positivos. La introducción
de esta técnica a mediados de los años sesenta, condujo a una disminución
drástica en la incidencia de los rechazos hiperagudos o acelerados del injerto.
Se sigue utilizando la técnica clásica de microlinfocitotoxicidad de
Terasaki, pero en los últimos años se están utilizando, de forma asociada,
técnicas más sensibles, como el incremento del tiempo de incubación tras la
incorporación del complemento a dos horas, la adición de antiglobulina humana
al test, técnicas de citometría de flujo, etc.
Las
pruebas cruzadas normalmente se llevan a cabo en cuatro fases: Lectura rápida,
lectura de 37º, lectura 37º/ Coombs, validación con eritrocitos sensibilizados.
El medio que rodea la prueba está muy relacionado con los potenciadores y con
la fuerza iónica que favorece la reacción antígeno-anticuerpo, por lo que debe
ser capaz de detectar anticuerpos activos a bajas temperaturas y diferenciar
entre reacciones positivas verdaderas y falsas.
Consta
de tres partes: 1. Prueba mayor (D), 2. Prueba menor (R), 3. Prueba autotestigo
(AT)
Fuente
imagen: https://images.app.goo.gl/AENy8ZA7L8VbMvZG6
PRUEBA CRUZADA MAYOR
Consiste
en poner en contacto el suero del receptor con glóbulos rojos del donante, es
un requerimiento fundamental para realizar transfusiones. La mejor manera de
detectar anticuerpos que pueden dañar las células rojas transfundidas y causar
una reacción hemolítica transfusional. La prueba cruzada mayor y menor tienen
como objetivos:
- Garantizar que los glóbulos rojos a transfundir son ABO compatibles con el receptor.
- Detectar anticuerpos en el suero del receptor que estén dirigidos contra antígenos presentes en los glóbulos rojos del donante.
LIMITACIONES DE LA PRUEBA.
- No garantiza la sobrevida normal de los glóbulos rojos del donante.
- No previenen la inmunización del receptor.
- No detectan todos los errores en la clasificación del sistema ABO.
- No detectan errores en la clasificación del factor Rh en el donante o en el receptor a menos que el suero contenga anticuerpos anti-Rh.
- No previenen reacciones hemolíticas tardías secundarias a respuestas anamnesticas a antígenos contra los cuales el paciente había sido previamente inmunizado, pero cuyos anticuerpos no eran demostrables en el momento en que se practicaron las pruebas de compatibilidad in vitro.
- No detectan anticuerpos anti-leucocitarios, anti-plaquetarios o contra proteínas.
- No previenen post-reacciones febriles o alérgicas provocadas por la sangre transfundida.
Fuente imagen: https://images.app.goo.gl/t6AuMSC3DHGMLSEVA
Identificación
del paciente y recolección de la muestra adecuada. Estudio del receptor:
- Determinación de los antígenos ABO/Rh.
- Prueba de Coombs directa.
- Determinación de anticuerpos irregulares. 3.-Selección de la sangre ABO/Rh adecuada para la transfusión
Permite
detectar una prueba de antiglobulina directa positiva, así como la presencia de
rouleaux y otras anormalidades autoinmunes (AHAI). Se realiza con 1 gota de
eritrocitos del receptor más 2 gotas de suero del receptor.
Fuente imagen: https://images.app.goo.gl/NvC5dcxDGf4VWznB7
REFERENCIAS
Importancia de las pruebas cruzadas y de la búsqueda de anticuerpos [Internet]. medigraphic. 2006 [citado 7 marzo 2021]. Disponible en: https://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2006/ims062j.pdf
Tapia J. dspaceunach
[Internet]. 2013 [citado 7 marzo 2021]. Disponible en:
http://dspace.unach.edu.ec/bitstream/51000/1161/1/UNACH-EC-LAB.CLIN-2013-0034.
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